1摘要桑叶为桑科落叶乔木桑树MorusalbaL.的叶始载于《神农本草经》药用历史悠久。近年的研究成果证实桑叶、桑白皮萃取物能通过抑制酪氨酸酶活性有效减少黑色素生成桑树因此备受美白产品的青睐。民间有人通过饮用桑树叶煎煮的汤剂和把新鲜桑叶捣碎敷脸来治疗色斑和青春痘但是把桑叶萃取精华添制于护肤品中则更为有效、安全和方便。虽然桑叶的美白成分及美白机理尚不清楚但随着桑叶研究的不断深入桑叶有望成为美容美白化妆品的重要原料。本课题主要研究了不同月份桑叶乙醇提取物及分离各部位的酪氨酸酶抑制活性抗氧化和清除DPPH·活性总黄酮含量与酪氨酸酶抑制性的关系。对筛选出的洗脱有效部位进行成分的初步分析和化妆品急性安全性评价为桑叶美白化妆品的开发提供参考。1.本课题中桑叶粗提物用50%乙醇作提取溶剂分离洗脱有效部位用水-乙醇梯度洗脱浓缩、冻干后保存备用。通过对40种天然中草药进行酪氨酸酶抑制活性测定得出抑制活性较高的原料为桑叶和桑白皮并确定以桑叶为进一步研究材料。2.考察不同采摘期桑叶的酪氨酸酶抑制性并用NaNO2-Al(NO3)3显色法测定各提取物的总黄酮含量结果表明桑叶酪氨酸酶抑制活性与总黄酮的含量可能存在正相关其中以11月份桑叶提取物的总黄酮含量最高27.71mg/g酪氨酸酶抑制率也最大78.48%同时对11月份提取物分离的各部位进行总黄酮含量测定结果显示酪氨酸酶抑制活性最高的为50%乙醇洗脱部位抑制率为95.09%总黄酮含量为30.86mg/g但其总黄酮含量低于活性较高的25%乙醇洗脱部位抑制率为78.44%总黄酮含量为34.96mg/g。综合以上结果可作如下推测即酪氨酸酶的抑制活性不仅与总黄酮含量有关而且与其成分的类别有关极性大的黄酮苷的酪氨酸酶抑制活性小于黄酮苷元这与相关文献研究结果相一致。3.HPLC法对50%乙醇洗脱部位进行成分初步分析测得该洗脱有效部位存在芦丁和槲皮素两种活性物质但含量有差别。芦丁含量甚少不具有统计学意义作忽略处理槲皮素含量较高经计算该洗脱有效部位中槲皮素的平均含量为2.46%RSD为2.9%。HPLC方法精密度高重复性良好结果真实可靠。4.分别以总抗氧化试剂盒和清除DPPH·法考察不同样品及各部位的抗氧化性和清除自由基活性总体而言抗氧化性越好清除自由基能力越强。扬州大学硕士学位论文25.本课题拟以桑叶提取物为原料为开发相应的化妆品提供依据。选做了化妆品安全性评价的三项基本试验即急性经口毒试验、急性皮肤毒/皮肤腐蚀试验和急性眼刺激试验初步评价结果表明本论文提取工艺所得的桑叶提取物为无毒、无刺激、安全性良好的化妆品原料。
1桑叶的概述1.1桑叶的研究现状桑叶始载于《神农本草经》药用历史悠久。桑叶为桑科落叶乔木桑树MorusalbaL.桑叶味苦、性寒、有散风去热、清肝明目等功效主要用于外感风热所致的发热、头昏头痛、咳嗽、咽喉肿痛等症还用于肝经实热或风热所致的目赤、涩痛、多泪等症。长期以来桑叶一直作为养蚕的主要饲料此外桑叶也是一种很好的中药。作为国家卫生部批准的药食两用原料安全性好、无副作用应用广泛。民间已有用桑树煎煮的汤剂和把新鲜桑叶捣碎敷脸来治疗色斑和青春痘且效果显著。近年来对桑叶的药理研究主要集中于对其降血脂、降血糖、降血压等作用方面对其抗氧化、抗衰老、美白等作用方面的研究较少。据文献报道桑叶的乙醇提取物对酪氨酸酶活性有一定的抑制作用。桑叶含有N-甲基-1-脱氧野尻霉素N-Me-DNJ、2-氧-α-D-半乳糖吡喃糖苷-1-DNJGAL-DNJ、Fagomine等降血糖活成分具有显著的降血糖作用且毒性小服用安全作为抗糖尿病新药开发用具有广阔前景。广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所从桑叶中提取降糖有效成分并将其开发成防治糖尿病的新产品—桑宁茶药理和临床试验证明其降糖效果明显已获得发明专利授权。日本曾兴起一股食用桑叶的热潮在我国也因其风味独特、绿色无害、天然保健等特点受到人们的喜爱。目前利用桑叶研制的食品很多包括普通食品、保健食品、饮料、调味品等己开发的产品如桑叶茶、桑叶汁饮料、桑叶酒、桑叶醋、桑叶酱等。桑叶作为食品、药品、化妆品等的重要原料对其有效成分进行萃取纯化、分析和应用是今后发展的重点。1.2桑叶的化学成分及药理作用桑叶营养丰富含有人体所需的17种氨基酸7种维生素还含有锌锰钙铁等营养元素具有药性平和无毒副作用等特点。作为调节生理、维护健康、增强体质的食品越来越受人们的欢迎特别适合糖尿病和高血压患者。国家卫生部年第45号文公布批准桑叶既是食品又是药品。近年来人们对桑叶的化学成分药理作用方面进行了较深入的研究研究表明桑叶的萃取物对祛斑和治疗青春痘均有较好的疗效有很好的美容效果还具有降血糖、降血脂、抗炎、抗衰老、清除氧自由基、抗肿瘤等作用。1.2.1化学成分扬州大学硕士学位论文6桑叶含有丰富的黄酮类化合物约占桑叶干重的1%~3%是所有植物茎叶中含量较高的一种。此外还含有甾体及三萜类化合物、香豆素、挥发油、生物碱、氨基酸、有机酸、维生物等成分。桑叶中食用纤维含量达14.5%超过蔬菜和水果。1.2.2桑叶的药理作用1.2.2.1降血糖作用近年来国内外学者对桑叶的降血糖活性成分进行了深入研究。研究表明生物碱和多糖类成分是桑叶中主要的降血糖活性成分。Asano等[10]比较了从桑叶中分离到的七种生物碱的降血糖活性发现多羟基去甲莨菪碱CalystegineB2具有很强的糖苷酶α-葡萄糖苷酶和β-半乳糖苷酶抑制作用。Kimura研究了除CalystegineB2以外的六种生物碱对由链脲菌素streptozocinSTZ引起的糖尿病小鼠的降糖作用结果表明N-Me-DNJ、GAL-DNJ、Fagomine都可显著的降低血糖水平其中GAL-DNJ和Fagomine降血糖作用较强。方晓等研究了桑叶浸出液对糖尿病大鼠的降血糖作用试验发现其对实验性糖尿病大鼠有显著的降血糖作用初步认为降血糖的活性成分为生物碱。日本学者利用自然发病且症状类似成人型糖尿病和糖尿病合并症的大白鼠进行研究给糖尿病大白鼠喂饲含2.5%和5%桑叶的饲料证实桑叶具有抑制血糖升高和提高葡萄糖耐受量的作用。进一步研究发现主要作用的成分是1-脱氧野尻霉素1-DNJC6H13NO4分子量.17该化合物能与小肠中的麦芽糖酶、蔗糖酶和乳糖酶等α-糖苷酶结合且结合亲和性大于麦芽糖、蔗糖和乳糖。1-DNJ与上述酶结合使双糖不能进一步分解为单糖导致双糖无法被吸收从而明显抑制了食后血糖急剧升高的现象耐糖量试验GTT亦表明桑叶能抑制胰腺兰格尔罕氏岛的病变进展同时可维持胰岛素的分泌抑制血糖值的升高延缓糖尿病的发作和恶化此类效应与DNJ呈明显的剂量依赖性。桑叶多糖、生物碱及产品中其他成分有一定的协同配伍作用。Ito等将类黄酮与DNJ结合或者与桑叶中的DNJ结合并将其加入到饮料中这种饮料比单独的DNJ或者是桑叶中所含的DNJ更能有效抑制血糖的上升。1.2.2.2抗炎作用陈福君等研究了桑叶的抗炎作用发现桑叶对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀、醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶所致的小鼠足趾浮肿等具有明显的抑制作用表明桑叶具有较强的抗炎作用与祛风、清热功效相符。实验证明桑叶清热解毒的功效对桑叶酪氨酸酶抑制性成分的研究及应用7治疗青春痘具有良好的效果。1.2.2.3抗衰老作用通常在老年斑和褐色斑及雀斑形成时可发现过氧化脂质在皮肤内大量蓄积而增加。浙江医科大学临床药理研究所科研小组经过4年的测试和临床跟踪得出桑叶具有类似人参的补益与抗衰老、稳定神经系统功能等作用能缓解生理变化引起的情绪激动提高体内及皮肤表皮细胞内超氧化物歧化酶活性加强活性氧自由基消除阻止体内有害物质产生改善机体代谢减少或消除已经产生并积滞于体内的脂褐质。1.2.2.4清除氧自由基的作用自由基是体内重要的致病因子与多种疾病的发生有关。过量的自由基能破坏皮肤的正常生理功能加速皮肤老化使色素沉着增多或加深。黄代青等用发光法进行研究发现桑叶提取液对体外氧自由基系统、黄嘌呤-嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子、Fenton体系产生的羟自由基和过硫酸胺N,N,N′N′-四甲基乙二胺体系产生的氧自由基均有较强的清除作用。同时还研究了高浓度提取液对果蝇寿命的影响结果表明桑叶提取液对上述系统产生的氧自由基和羟自由基具有相当强的清除作用在剂量比《中医大辞典》规定的大3倍以上时并不降低雌雄果蝇的平均寿命且对雌雄果蝇的最高寿命均有一定的提高。Kim等报道从桑叶中分离到的类黄酮具有显著的清除自由基作用。1.2.2.5抑制酪氨酶活性作用桑树提取物是由法国人开发出来的最新的美白成分其作用温和有效、自然美白。近年的研究成果证实从桑叶、桑白皮萃取的有效成分能抑制酪氨酸酶的活性有效减少黑色素生成桑树因此备受美白产品的青睐。民间有人通过饮用桑树叶煎煮的汤剂和把新鲜桑叶捣碎敷脸来治疗色斑和青春痘但将桑叶萃取精华添制于护肤品中则更为有效、安全和方便。桑叶富含黄酮类、酚类、氨基酸、有机酸、胡萝卜素、维生素及多种人体所需的微量元素等这些活性物质协同作用对皮肤有营养、保湿及修复作用可以增加弹性、消除色素沉着、防止皮肤粗糙。虽然桑叶的美白成分及美白机理尚未明确但随着桑叶研究的不断深入桑叶将成为美容美白化妆品的重要原料之。1.3我国的桑叶资源情况桑叶又名“铁扇子”属于桑科桑属植物桑树(MorusalbaL.)的叶。桑原产于中国和朝鲜全球约有16种分布于北温带、亚洲热带和非洲热带及美洲地区我国约有11种分布于全国大部分地区以长江流域尤其江浙一带为多在我国己有多年的栽培扬州大学硕士学位论文8历史现有近千万亩桑园是世界上最大的桑树种植国。桑树桑树生长快适应性强宜植区广对土质要求不高不占耕地耐剪伐产叶量高。桑叶是桑树的主要产物约占地上部产量的64%每年可摘3-6次生命力很强。桑叶在我国有着极大的资源优势。年据商务部初步统计中国现有桑园面积高达万亩以鲜桑叶亩产量斤/年保守估计年我国鲜桑叶将达到.3亿斤。我国国家卫生部于年公布桑叶为药食两用品目前除养蚕外桑叶并未被充分利用出现了大量桑叶过剩的现象浪费了大量宝贵资源。因此有必要对桑叶丰富的营养成分和生物活性成分进行深入研究寻找桑叶的多用途开发渠道改善传统的桑叶利用结构既可以充分利用自然和土地资源又可以提高桑叶的利用价值。1.4桑叶美白活性研究进展近年来天然成分的皮肤美白剂的应用成为人们治白癜风乌鲁木齐哪家医院好太原最好的白癜风医院
